Apa itu pertukaran ion kromatografi? + Contoh

Apa itu pertukaran ion kromatografi? + Contoh
Anonim

Menjawab:

Ini adalah proses untuk memisahkan berbagai protein berdasarkan muatan dan sifat pengikatannya pada suatu bahan.

Penjelasan:

Pada pH berbeda protein berbeda membawa muatan berbeda. Dengan menempatkan campuran protein pada pH tertentu Anda dapat memiliki campuran yang mengandung protein dengan sifat muatan berbeda.

Jika campuran protein ini dituangkan ke kolom yang berisi bahan dengan muatan di atasnya, kolom akan mengikat protein dalam muatan berlawanan.

Anda kemudian dapat menggunakan solusi yang berbeda yang mengandung jumlah ion yang berbeda untuk mengelusi (melepaskan) protein dari kolom.

Misalnya, Anda memiliki campuran protein dari mana Anda ingin memurnikan protein tertentu. Jika Anda tahu bahwa pada pH tertentu, protein yang Anda minati bermuatan positif, Anda bisa menuangkan campuran ke kolom yang mengandung bahan bermuatan negatif.

Semua protein yang tidak membawa muatan, atau ketika bermuatan negatif akan mengalir langsung melalui kolom. Anda kemudian dapat melepaskan protein bermuatan positif Anda dengan membanjiri kolom dengan ion positif yang akan menyelesaikan muatan negatif pada kolom. Persaingan ini kemudian akan menyebabkan protein yang Anda minati dielusi.

Ini adalah contoh dari kejadian ini.

Setiap baki berisi buffer pada konsentrasi yang berbeda dan seperti yang dapat dilihat pada sampel 175 mM (sudut kiri atas) sangat sedikit protein merah / coklat yang terikat pada membran bermuatan karena terdapat persaingan antara ion dalam buffer dan protein untuk situs pengikatan bermuatan pada membran (Ion-ion dalam buffer telah "menang" karena ada lebih banyak dari mereka sehingga mereka mencegah protein dari mengikat). Dalam sampel di kanan bawah, banyak protein yang terikat pada membran karena ada lebih sedikit ion yang bersaing untuk mendapatkan tempat pengikatan.

Dalam video ini Anda dapat melihat kromatografi penukar anion dalam operasi: