Mengapa kami menggunakan kontrol negatif di PCR?

Mengapa kami menggunakan kontrol negatif di PCR?
Anonim

Menjawab:

Lihat di bawah

Penjelasan:

PCR bekerja dari DNA templat. Katakanlah Anda sedang menguji HIV (HIV adalah virus RNA, tetapi ketika masuk ke dalam sel, itu akan berubah menjadi DNA …. jadi akan ada DNA HIV di dalam sel yang terinfeksi). Primer yang Anda gunakan akan membuat produk (amplikon) yang sesuai dengan bagian dari DNA HIV. Jika Anda melihat amplikon ini, maka Anda memiliki urutan HIV hadir ….. tetapi jika Anda tidak memiliki kontrol negatif, Anda mungkin memiliki kontaminasi.

PCR sangat sensitif. Ada banyak solusi yang digunakan dalam PCR (air, buffer, dNTPs, enzim) … dan semuanya dapat dengan mudah terkontaminasi dengan DNA dari sampel lain, atau bahkan dari amplikon yang dibuat dalam reaksi yang Anda lakukan kemarin. Jadi, jika Anda memiliki sampel DNA Pasien X dan Anda memeriksa HIV dengan PCR, primer PCR dapat membuat produk dari DNA HIV dalam sampel DNA Pasien X (jika orang itu memiliki HIV), atau mungkin membuatnya dari kontaminasi. Tetapi Anda tidak bisa memastikan apakah itu dari kontaminasi atau dari HIV dalam DNA pasien.

Jadi Anda menjalankan kontrol air. Tabung 1 Anda menempatkan semua komponen reaksi, dan untuk DNA Anda hanya menambahkan air. Ini adalah kontrol negatif. TIDAK ADA yang seharusnya menguat di sini. Dalam Tube 2 Anda meletakkan semua komponen reaksi dan DNA Pasien X. Jika Anda mendapatkan produk di sini, (dan tidak ada dalam Tube 1), Pasien X mungkin memiliki DNA HIV dalam DNA-nya. Jika Anda mendapatkan produk di Tube 1 dan Tube 2, Anda memiliki masalah kontaminasi dan Anda tidak dapat mengetahui apakah HIV dalam sampel Pasien berasal dari penyakit atau dari kontaminasi.

Jadi, Anda selalu menjalankan kontrol air (air menggantikan DNA).