Dalam tes ELISA, apa yang dilakukan antibodi primer & antibodi sekunder?

Dalam tes ELISA, apa yang dilakukan antibodi primer & antibodi sekunder?
Anonim

Menjawab:

Itu tergantung pada jenis uji ELISA.

Penjelasan:

ELISA = Uji Imunosorben Tertaut Enzim.

Ada berbagai jenis tes ELISA. Yang Anda butuhkan adalah:

  • antibodi dengan enzim yang melekat padanya
  • antigen yang mengikat antibodi
  • substrat enzim yang menyebabkan reaksi terukur

Itu enzim melekat pada antibodi sering HRP (horseradish peroxidase). HRP dapat bereaksi dengan berbagai media yang mengubah warna atau memancarkan cahaya, keduanya dapat diukur.

Gambar menunjukkan ikhtisar dari berbagai jenis dari tes ELISA. Saya akan menjelaskan cara kerjanya di bawah.

ELISA langsung

Piring dilapisi dengan antigen (Ag) dan a antibodi primer dengan enzim ditambahkan. Ketika substrat ditambahkan, reaksi akan terjadi dan sebanding dengan jumlah interaksi antibodi-antigen.

ELISA tidak langsung

Sekali lagi, piring dilapisi dengan antigen dan a antibodi primer mengikat antigen. SEBUAH antibodi sekunder ditambahkan yang berikatan dengan antibodi pertama. Antibodi ke-2 mengandung enzim yang bereaksi dengan substrat.

Sandwich ELISA

Di sini dua atau tiga antibodi terlibat. Antibodi penangkap melekat pada pelat dan berikatan dengan antigen. Ini diikuti oleh langkah-langkah yang sama seperti metode langsung (hanya satu antibodi) atau tidak langsung (dua antibodi).

ELISA kompetitif

Kadang-kadang disebut penghambatan ELISA, sedikit lebih rumit. Sebuah piring dilapisi dengan antigen yang akan diteliti. SEBUAH antibodi primer dengan enzim pertama kali diinkubasi dengan sampel dengan konsentrasi antigen yang sama tidak diketahui. Ini kemudian ditambahkan ke piring, memungkinkan antibodi yang masih bebas bereaksi dengan antigen di piring. Setelah kompleks antibodi-antigen sampel dicuci, substrat ditambahkan.

Ketika sampel yang tidak diketahui memiliki banyak antigen, akan ada lebih sedikit antibodi yang bebas untuk diikat ke piring = sinyal yang lebih rendah.