Mengapa western blot digunakan untuk mengkonfirmasi elisa? + Contoh

Mengapa western blot digunakan untuk mengkonfirmasi elisa? + Contoh
Anonim

Menjawab:

Biasanya ini adalah tes spesifisitas antibodi.

Penjelasan:

Dalam ELISA, sangat sulit untuk mengetahui apakah antibodi Anda mengikat protein yang Anda minati, protein yang sama sekali berbeda, atau sejumlah protein.

Western blot akan digunakan untuk memeriksa spesifisitas antibodi (Anda harus mencatat bahwa Western blot mungkin tidak mendeteksi semua reaksi silang dengan protein yang salah).

Di Western Blot, Anda dapat melihat ukuran protein yang mengikat antibodi (Anda tidak bisa dalam ELISA). Karena itu, misalnya, jika antibodi Anda mengikat protein 56 kDa dan Anda melihat pita pada ~ 56 kDa pada blot maka Anda dapat cukup yakin bahwa antibodi mengikat protein yang benar.

Sebaliknya, jika Anda melihat pita pada 32 kDa Anda dapat menyimpulkan bahwa antibodi tersebut mengikat protein yang salah. Demikian juga, jika banyak pita muncul di Western blot maka itu akan menunjukkan (tanpa adanya degradasi protein) bahwa antibodi mengikat ke berbagai protein yang berbeda.

Dalam contoh pita 32 kDa yang muncul pada gel, dan juga beberapa pita, itu menunjukkan bahwa antibodi tersebut tidak memiliki kekhususan untuk ELISA dan bahwa setiap hasil yang terlihat dalam ELISA mungkin tidak spesifik untuk protein yang diminati.

Jika saya menjalankan tes semacam ini, saya dapat memasukkan semacam reagen "campur tangan" untuk menguji antibodi. Misalnya, jika saya telah mengangkat antibodi saya menjadi peptida, saya mungkin memasukkan peptida dalam larutan antibodi primer untuk menguji pengikatan yang benar. Yaitu, di hadapan peptida saya seharusnya tidak melihat pita atau tidak ada hasil dari ELISA karena antibodi primer saya tidak dapat mengikat karena adanya kelebihan peptida.