Mengapa GAPDH digunakan di Western Blot? + Contoh

Mengapa GAPDH digunakan di Western Blot? + Contoh
Anonim

Menjawab:

GAPDH sering digunakan sebagai kontrol pemuatan.

Penjelasan:

Di Western blotting kita sering menggunakan GAPDH sebagai kontrol pemuatan. Artinya, dengan memeriksa GAPDH kita dapat memeriksa bahwa kita memiliki jumlah protein setara yang dimuat pada jalur yang berbeda pada blot.

Contoh penggunaan - katakanlah kita memiliki penyakit yang kita pikir menyebabkan peningkatan protein tertentu dalam sel. Kami akan membuat sampel dari sel "sehat" dan sampel lain dari sel "sakit". Kami kemudian akan memuat jumlah protein yang setara dari kedua sampel ke dalam gel untuk Western blot.

Setelah memeriksa noda untuk protein yang kami minati, kami menemukan bahwa pada sel-sel yang sakit tingkat proteinnya memang meningkat (yaitu pita yang lebih gelap dihasilkan pada noda tersebut). Untuk membuktikan bahwa peningkatan protein ini disebabkan oleh perubahan ekspresi dalam sel, alih-alih artefak pemuatan (yaitu, semakin banyak instense band disebabkan oleh perubahan ekspresi protein dalam sel, dan bukan oleh kami secara tidak sengaja memuat lebih banyak dari sampel "penyakit" daripada "sehat") kami juga akan menyelidiki noda untuk GAPDH untuk menunjukkan bahwa kadar protein total adalah sama di kedua jalur.

Oleh karena itu, dengan melakukan ini, kami menunjukkan bahwa protein setara telah dimuat di dua jalur dan bahwa perubahan intensitas pita yang kami amati adalah karena perubahan ekspresi protein untuk protein yang diminati.