Menjawab:
Banyak…
Penjelasan:
Ada banyak alasan mengapa band mungkin tidak muncul di western blot. Apakah kombinasi sampel dan antibodi berhasil di masa lalu?
Berikut adalah beberapa yang dapat saya pikirkan saat ini yang dapat menyebabkan band tidak muncul:
-
Apakah protein dipindahkan dari gel? Cobalah pewarnaan selaput dengan sesuatu seperti ponceau S atau amido hitam untuk melihat apakah ada band. Terkadang, Anda dapat melihat pita protein pada membran dengan membasahi dan memegangnya pada sudut ke cahaya.
-
Apakah antibodi primer berfungsi? Ini adalah tes yang sulit dan satu-satunya cara Anda bisa adalah dengan memasukkan kontrol positif di mana Anda tahu Anda memiliki protein yang menarik. Jika Anda memiliki beberapa protein yang menarik, Anda dapat mencoba melihatnya di membran Western blotting (mis. Anda tidak menjalankan gel) dan melihat apakah Anda mendapatkan hasil jika Anda memproses membran seolah-olah itu adalah western blot.
-
Apakah antibodi sekunder mengenali antibodi primer? Sekali lagi, yang sulit untuk diuji. Tentang satu-satunya tes yang dapat Anda lakukan adalah tes spot yang disebutkan di atas dalam 2.
-
Apakah "sistem deteksi" berfungsi? Bergantung pada metode pendeteksian yang Anda gunakan, Anda bisa mencoba melompati beberapa antibodi sekunder untuk melihat apakah solusi pendeteksiannya, dan juga zat pemicu / enzim pada antibodi sekunder, berfungsi. Yaitu, dapatkah Anda memicu reaksi hanya dengan antibodi sekunder?
Akhirnya, itu bisa sesederhana salah satu solusi yang digunakan selama penyelidikan plot yang dibuat secara tidak benar. Misalnya, jika konsentrasi garam salah dalam buffer maka ini dapat menyebabkan antibodi dilepaskan dari noda. Hal yang sama juga akan terjadi jika pH buffer salah.
Penyebab "paling aneh" untuk noda barat yang tidak berfungsi yang saya alami alami adalah ketika kami mengganti pemasok susu bubuk yang kami gunakan untuk memblokir membran. Serbuk dari pemasok baru itu mengandung fosfatase fosfotyrosin yang menghilangkan semua gugus fosfat yang kami coba deteksi dengan antibodi anti-fosfotyrosin kami.
Orang Yunani kuno berjuang dengan tiga masalah geometris yang sangat menantang. Salah satunya, "Hanya menggunakan kompas, dan straightedge memunculkan sudut?". Teliti masalah ini dan diskusikan? Apa itu mungkin? Jika ya atau tidak, jelaskan?
Solusi untuk masalah ini tidak ada. Baca penjelasan di http://www.cut-the-knot.org/arithmetic/antiquity.shtml
Joe sedang bermain game dengan dadu biasa. Jika angkanya genap, dia akan mendapatkan 5 kali lipat angka yang muncul. Jika itu aneh, ia akan kehilangan 10 kali jumlah yang muncul. Dia melemparkan 3. Apa hasil sebagai bilangan bulat?
-30 Seperti yang dinyatakan masalah, Joe akan kehilangan 10 kali angka ganjil (3) yang muncul. -10 * 3 = -30
Salah satu masalah Yunani Kuno yang terkenal mencakup, konstruksi persegi yang luasnya sama dengan lingkaran dengan hanya menggunakan kompas dan penggaris-sejajar. Teliti masalah ini dan diskusikan? Apa itu mungkin? Jika tidak atau ya, jelaskan dengan jelas dan rasional?
Tidak ada solusi untuk masalah ini. Baca penjelasan di http://www.cut-the-knot.org/arithmetic/antiquity.shtml