Mengapa DNase dan lisozim dalam tahap lisis digunakan selama pemurnian protein?

Mengapa DNase dan lisozim dalam tahap lisis digunakan selama pemurnian protein?
Anonim

Menjawab:

Untuk memurnikan Fraksi Protein …

Penjelasan:

Jika Anda memurnikan protein (seringkali spesifik), Anda harus membuang sebanyak mungkin sampah yang mungkin terikat padanya.

Tergantung sejauh mana protein yang Anda kejar, tetapi umumnya itu adalah ide yang baik, terutama di persiapan pemurnian, untuk menghilangkan kotoran sebanyak mungkin.

1:

Karena protein umumnya besar, dan akibatnya akan muncul di pita yang lebih rendah dari fraksi (ultrasentrifugasi) Anda, Anda ingin menghilangkan asam nukleid, terutama jika protein yang Anda puryfying berkaitan dengan orang-orang seperti Pol1, Reverse Transcriptase atau enzim lain yang terlibat dalam Replikasi / Transkripsi / Terjemahan..

Anda dapat memisahkan asam Nukleat yang ada dalam sampel dengan menggunakan DNAse: ini akan benar-benar menghidrolisis DNA menjadi bagian-bagiannya.

Pikiran Anda, ada berbagai DNAse, semuanya berbeda dalam mekanisme dan spesifisitas untuk substrat mereka. Tergantung pada DNAse yang digunakan, itu dapat menunjukkan baik Endo- atau Exo- kegiatan nuclease …

Lebih tepatnya, RNAse lebih cocok, karena RNA biasanya lebih dalam kisaran daya apung / fraksi protein, dan dapat terikat dengan protein.

2:

Lisozim: Enzim yang memiliki setidaknya dua fungsi:

Ini mendegradasi enzim: Sebagian besar protein yang dibawa dalam aliran darah adalah Glikosilasi: mereka memiliki beberapa molekul gula yang melekat padanya. Lisozim akan menghilangkan residu gula.

Ini juga memiliki kapasitas untuk memecah dinding sel bakteri Gram-Positif, menyebabkan mereka Lyse. (jika Anda ingin memurnikan protein dari bakteri Gram-positif)

Setiap produk yang terdegradasi, baik asam nukleat atau puing-puing gula, akan muncul di bagian atas Centrifuge Tube karena daya apung mereka yang "lebih ringan" ….